視頻測(cè)量顯微鏡被稱為“視頻”，因?yàn)樗鼘鹘y(tǒng)的顯微鏡與攝像系統(tǒng)、顯微鏡或計(jì)算機(jī)相結(jié)合，這使得顯微鏡的觀察結(jié)果能夠以數(shù)據(jù)的形式長(zhǎng)期存儲(chǔ)。今天的顯微鏡非常強(qiáng)大。它的智能化、人性化和可擴(kuò)展性使視頻測(cè)量顯微鏡非常受歡迎。那么視頻測(cè)量顯微鏡應(yīng)該如何調(diào)試呢？讓我們來看看。
1、在正式試驗(yàn)過程中，應(yīng)分別采用陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，并將試驗(yàn)樣品一式兩份，以確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)背景較高，表明存在非特異性反應(yīng)，可以用羊血清、兔血清或BSA阻斷。
2.在ELISA中，各種實(shí)驗(yàn)條件的選擇非常重要，包括：
（1） 固體載體的選擇：許多物質(zhì)可用作固體載體，如PVC、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺和纖維素。形式可以是凹板、試管、珠等，目前常用的是40孔聚苯乙烯凹板。無論是哪種載體，都可以在使用前進(jìn)行篩選：用相同量的抗原包被，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下反應(yīng)，觀察其顏色反應(yīng)是否均勻，判斷其吸附性能是否良好。
（2） 涂層抗體（或抗原）的選擇：當(dāng)抗體（或抗體）吸附在固體載體表面時(shí)，要求純度良好，PH值通常要求在9.0至9.6之間。吸附溫度、時(shí)間和蛋白質(zhì)含量也有一定影響，一般為4℃18-24小時(shí)。需要滴定蛋白質(zhì)涂層的適當(dāng)濃度：不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μG/ml等），在其他測(cè)試條件相同的情況下觀察陽(yáng)性樣品的OD值。選擇OD值高、蛋白質(zhì)含量低的濃度。大多數(shù)蛋白質(zhì)通常為1～10μg/ml。
（3） 酶標(biāo)抗體工作濃度的選擇：首先，用直接ELISA滴定初始滴度（見酶標(biāo)抗體部分）。然后固定其他條件或使用“方陣法”（涂層的不同稀釋度、待測(cè)樣品的參考物和酶標(biāo)記抗體）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中準(zhǔn)確滴定其工作濃度。
（4） 酶底物和供氫體的選擇：供氫體選擇的要求便宜、安全、顯色反應(yīng)明顯，但無色。一些氫供體（如OPD等）具有潛在的致癌作用，應(yīng)予以保護(hù)。合格者應(yīng)使用非致癌和敏感的氫供體，如TMB和ABTS，這些供體目前相對(duì)令人滿意。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿終止反應(yīng)。通常，基材作用時(shí)間為10-30分鐘。
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